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蛋白酶K

十月 05, 2023

在分子生物学中蛋白酶K（英語：Proteinase K，EC 3.4.21.64，也被称为内肽酶K（endopeptidase K）、腐生真菌碱性蛋白酶（Tritirachium alkaline proteinase）、腐生真菌丝氨酸蛋白酶（Tritirachium album serine proteinase）、腐生真菌蛋白酶K（Tritirachium album proteinase K），是一种用途广泛的丝氨酸蛋白酶[2][3][4]。这种酶于1974年在真菌 白色侧齿霉菌（英语：Engyodontium album）（Engyodontium album）的提取物中发现[5]。蛋白酶K能消化天然的角蛋白（Kerati），而得名蛋白酶K。其主要的切割位点是脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。由于其广泛地的切割能力，在实验室中很常用。此蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶SB超家族中的S8家族（枯草杆菌蛋白酶也属于这个超家族）。蛋白酶K的分子量为28.9千道尔顿。

Proteinase K
蛋白酶K
蛋白酶K的结构[1]
识别码
EC編號 3.4.21.64
数据库
IntEnz IntEnz浏览
BRENDA（英语：BRENDA） BRENDA入口
ExPASy（英语：ExPASy） NiceZyme浏览
KEGG KEGG入口
MetaCyc（英语：MetaCyc） 代谢路径
PRIAM（英语：PRIAM_enzyme-specific_profiles） 概述
PDB RCSB PDB PDBj PDBe PDBsum

酶活性 编辑

酵素偏好的切位是在疏水性胺基酸後的位置。本酵素由鈣活化，雖然鈣並不會影響酵素的活性，但它可使酵素更穩定。

在足量酵素濃度及作用時間的環境下，蛋白質會完全被水解。若移除鈣離子，蛋白酶K的穩定性會大幅降低，但其水解活性仍然存在[6]。蛋白酶K對於鈣離子具有兩個結合位，都在活性中心附近，但都與催化反應無直接關聯。 在常用缓冲液中的蛋白酶K活性

缓衝液（pH = 8.0, 50°C, 蛋白酶K濃度：1.25 µg/mL ,作用15分鐘） 蛋白酶K活性（%）
30 mM Tris·Cl 100
30 mM Tris·Cl; 30 mM EDTA; 5% Tween 20（英语：Polysorbate 20）; 0.5% Triton X-100; 800 mM GuHCl（英语：Guanidinium chloride） 313
36 mM Tris·Cl; 36 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.36% Triton X-100; 735 mM GuHCl 301
10 mM Tris·Cl; 25 mM EDTA; 100 mM NaCl; 0.5% SDS 128
10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 20 mM NaCl; 1% Sarkosyl（英语：Sodium lauroyl sarcosinate） 74
10 mM Tris·Cl; 50 mM KCl; 1.5 mM MgCl2; 0.45% Tween 20; 0.5% Triton X-100 106
10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 0.5% SDS 120
30 mM Tris·Cl; 10 mM EDTA; 1% SDS 203

应用 编辑

蛋白酶K時常應用於分子生物學領域。在製備核酸時，蛋白酶K可以將雜蛋白去除，並迅速使核酸酶失活，避免其降解目標產物DNA和RNA。另外，蛋白酶K還有其他優點，它在變性劑存在下仍能保有活性，如SDS、尿素、EDTA等等，這點與其他蛋白酶（如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶）相當不同。

参考文献 编辑

  1. ^ Betzel C, Singh TP, Visanji M, Peters K, Fittkau S, Saenger W, Wilson KS. Structure of the complex of proteinase K with a substrate analogue hexapeptide inhibitor at 2.2-A resolution. J. Biol. Chem. July 1993, 268 (21): 15854–8. PMID 8340410. 
  2. ^ Morihara K, Tsuzuki H. Specificity of proteinase K from Tritirachium album Limber for synthetic peptides. Agric. Biol. Chem. 1975, 39: 1489–1492. doi:10.1271/bbb1961.39.1489. 
  3. ^ Kraus E, Kiltz HH, Femfert UF. The specificity of proteinase K against oxidized insulin B chain. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. February 1976, 357 (2): 233–7. PMID 943367. 
  4. ^ Jany K-D, Lederer G, Mayer B. Amino acid sequence of proteinase K from the mold Tritirachium album Limber. FEBS Lett. 1986, 199: 139–144. doi:10.1016/0014-5793(86)80467-7. 
  5. ^ Ebeling W, Hennrich N, Klockow M, Metz H, Orth HD, Lang H. Proteinase K from Tritirachium album Limber. Eur. J. Biochem. August 1974, 47 (1): 91–7. PMID 4373242. doi:10.1111/j.1432-1033.1974.tb03671.x. 
  6. ^ Müller A, Hinrichs W, Wolf WM, Saenger W. Crystal structure of calcium-free proteinase K at 1.5-A resolution. J. Biol. Chem. September 1994, 269 (37): 23108–11. PMID 8083213. 

外部链接 编辑

  • Worthington enzyme manual

十月 05, 2023
蛋白酶k, 在分子生物学中, 英語, proteinase, 也被称为内肽酶k, endopeptidase, 腐生真菌碱性蛋白酶, tritirachium, alkaline, proteinase, 腐生真菌丝氨酸蛋白酶, tritirachium, album, serine, proteinase, 腐生真菌, tritirachium, album, proteinase, 是一种用途广泛的丝氨酸蛋白酶, 这种酶于1974年在真菌, 白色侧齿霉菌, 英语, engyodontium, album, en. 在分子生物学中蛋白酶K 英語 Proteinase K EC 3 4 21 64 也被称为内肽酶K endopeptidase K 腐生真菌碱性蛋白酶 Tritirachium alkaline proteinase 腐生真菌丝氨酸蛋白酶 Tritirachium album serine proteinase 腐生真菌蛋白酶K Tritirachium album proteinase K 是一种用途广泛的丝氨酸蛋白酶 2 3 4 这种酶于1974年在真菌 白色侧齿霉菌 英语 Engyodontium album Engyodontium album 的提取物中发现 5 蛋白酶K能消化天然的角蛋白 Kerati 而得名蛋白酶K 其主要的切割位点是脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键 由于其广泛地的切割能力 在实验室中很常用 此蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶SB超家族中的S8家族 枯草杆菌蛋白酶也属于这个超家族 蛋白酶K的分子量为28 9千道尔顿 Proteinase K蛋白酶K蛋白酶K的结构 1 命名系统命名缩写识别码EC編號 3 4 21 64数据库IntEnz IntEnz浏览BRENDA 英语 BRENDA BRENDA入口ExPASy 英语 ExPASy NiceZyme浏览KEGG KEGG入口MetaCyc 英语 MetaCyc 代谢路径PRIAM 英语 PRIAM enzyme specific profiles 概述PDB RCSB PDB PDBj PDBe PDBsum搜索PMC 相关文献PubMed 相关文献 目录 1 酶活性 2 应用 3 参考文献 4 外部链接酶活性 编辑酵素偏好的切位是在疏水性胺基酸後的位置 本酵素由鈣活化 雖然鈣並不會影響酵素的活性 但它可使酵素更穩定 在足量酵素濃度及作用時間的環境下 蛋白質會完全被水解 若移除鈣離子 蛋白酶K的穩定性會大幅降低 但其水解活性仍然存在 6 蛋白酶K對於鈣離子具有兩個結合位 都在活性中心附近 但都與催化反應無直接關聯 在常用缓冲液中的蛋白酶K活性 缓衝液 pH 8 0 50 C 蛋白酶K濃度 1 25 µg mL 作用15分鐘 蛋白酶K活性 30 mM Tris Cl 10030 mM Tris Cl 30 mM EDTA 5 Tween 20 英语 Polysorbate 20 0 5 Triton X 100 800 mM GuHCl 英语 Guanidinium chloride 31336 mM Tris Cl 36 mM EDTA 5 Tween 20 0 36 Triton X 100 735 mM GuHCl 30110 mM Tris Cl 25 mM EDTA 100 mM NaCl 0 5 SDS 12810 mM Tris Cl 100 mM EDTA 20 mM NaCl 1 Sarkosyl 英语 Sodium lauroyl sarcosinate 7410 mM Tris Cl 50 mM KCl 1 5 mM MgCl2 0 45 Tween 20 0 5 Triton X 100 10610 mM Tris Cl 100 mM EDTA 0 5 SDS 12030 mM Tris Cl 10 mM EDTA 1 SDS 203应用 编辑蛋白酶K時常應用於分子生物學領域 在製備核酸時 蛋白酶K可以將雜蛋白去除 並迅速使核酸酶失活 避免其降解目標產物DNA和RNA 另外 蛋白酶K還有其他優點 它在變性劑存在下仍能保有活性 如SDS 尿素 EDTA等等 這點與其他蛋白酶 如胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 相當不同 参考文献 编辑 Betzel C Singh TP Visanji M Peters K Fittkau S Saenger W Wilson KS Structure of the complex of proteinase K with a substrate analogue hexapeptide inhibitor at 2 2 A resolution J Biol Chem July 1993 268 21 15854 8 PMID 8340410 Morihara K Tsuzuki H Specificity of proteinase K from Tritirachium album Limber for synthetic peptides Agric Biol Chem 1975 39 1489 1492 doi 10 1271 bbb1961 39 1489 Kraus E Kiltz HH Femfert UF The specificity of proteinase K against oxidized insulin B chain Hoppe Seyler s Z Physiol Chem February 1976 357 2 233 7 PMID 943367 Jany K D Lederer G Mayer B Amino acid sequence of proteinase K from the mold Tritirachium album Limber FEBS Lett 1986 199 139 144 doi 10 1016 0014 5793 86 80467 7 Ebeling W Hennrich N Klockow M Metz H Orth HD Lang H Proteinase K from Tritirachium album Limber Eur J Biochem August 1974 47 1 91 7 PMID 4373242 doi 10 1111 j 1432 1033 1974 tb03671 x Muller A Hinrichs W Wolf WM Saenger W Crystal structure of calcium free proteinase K at 1 5 A resolution J Biol Chem September 1994 269 37 23108 11 PMID 8083213 外部链接 编辑Proteinase K Worthington enzyme manual 取自 https zh wikipedia org w index php title 蛋白酶K amp oldid 60862154, 维基百科，wiki，书籍，书籍，图书馆，

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