酶谱法 或酶谱 （英语 ：Zymography）是一种基于酶 的底物库来检测水解酶 的凝胶电泳 技术。使用三种类型的酶谱法；凝胶酶谱法 、原位酶谱法 和体内酶谱法 中。[2] 明胶 将被凝胶 中运行的活性明胶酶 消化。考马斯亮蓝 染色后，退化区域在深色染色背景下显示为清晰的条带。[3]
酶谱 一词的现代用法已经被用来定义发酵 产品的研究和编目 ，例如啤酒 或葡萄酒 ，通常由特定的酿酒师或在确定的发酵类别中进行，例如使用特定的酵母菌 株或细菌 种类。酶谱也指相关的发酵产品的集合，被视为一个作品集。例如，特定啤酒厂生产的所有啤酒都可以统称为其酶谱。
另见酶学（又称酶谱应用科学）。酶学涉及发酵的生化过程，特别是酿造、酿酒和其他发酵食品中发酵酵母和细菌的选择。例如，啤酒酿造涉及应用顶部（淡啤酒）或底部发酵酵母（啤酒），以生产所需的各种啤酒。酵母的合成会影响啤酒的风味特征，即双乙酰 （黄油、奶油糖果的味道或香气）。
凝胶酶谱法 用于SDS-PAGE 的样品将在标准非还原加载缓冲液中制备。在这过程中不需要还原剂或将其煮沸，因为它们会干扰酶的重新折叠。在丙烯酰胺凝胶的制备过程中，将合适的底物 （例如用于蛋白酶 检测的明胶 或酪蛋白 ）包埋在分离胶中。电泳 后，通过在未缓冲的曲拉通X-100 中孵育从而将凝胶（或酶谱）中的十二烷基硫酸钠 去除，然后在适当的消化缓冲液中孵育，以便在37°C下的最佳时间长度孵育。随后对酶谱进行染色（通常使用氨基黑10B或考马斯亮蓝 ），消化区域显示为清晰的条带，而底物已被酶降解的则呈现深色染色背景。
标准协议的变体 标准方案可能需要根据样品酶进行修改；例如，黑腹果蝇 消化糖苷酶 通常在还原条件下（即存在2-巯基乙醇 或二硫苏糖醇 ）以及在一定程度上加热条件下存活。事实上，加热到50°C后的分离往往会表现出条带分辨率的显着增加，而没有明显的活性损失。[4] [5]
过去用于α-淀粉酶 活性酶谱分析的常用方案也就是所谓的W.W.多恩淀粉膜方案。这里运行天然PAGE凝胶以分离匀浆中的蛋白质 。随后，将其中溶解（或更准确地说，悬浮）淀粉的薄凝胶覆盖在原始凝胶上一段时间。[6] 卢戈氏碘液 对淀粉 染色。
凝胶酶谱通常用于检测和分析微生物 产生的酶。[7] [8]
反向酶谱将底物和酶与丙烯酰胺共聚 ，可用于证明酶抑制剂 的活性。染色后，抑制区域可视化为透明（或轻微染色）背景下的暗条带。
在印记技术中，酶通过非变性凝胶电泳 分离，凝胶置于底物处理过的洋菜 上。[9]
酶谱法也可应用于其他类型的酶，包括木聚糖酶 、脂肪酶 和几丁质酶 。
参见
参考资料 ^ Hempelmann, E.; Putfarken, B.; Rangachari, K.; Wilson, R.J.M. Immunoprecipitation of malarial acid endopeptidase. Parasitology. 1986, 92 (2): 305–312. PMID 3520446 . doi:10.1017/S0031182000064076 . ^ Vandooren J, Geurts N, Martens E, Van den Steen PE, Opdenakker G. Zymography methods for visualizing hydrolytic enzymes. Nat Methods. 2013, 10 (3): 211–220. PMID 23443633 . S2CID 5314901 . doi:10.1038/nmeth.2371 . ^ Gelatin zymography protocol | Abcam. www.abcam.com. [2017-05-12 ] （英语） . ^ Martínez TF, Alarcón FJ, Díaz-López M, Moyano FJ. Improved detection of amylase activity by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis with copolymerized starch.. Electrophoresis. 2000, 21 (14): 2940–2943. PMID 11001307 . doi:10.1002/1522-2683(20000801)21:14<2940::AID-ELPS2940>3.0.CO;2-S . ^ Snoek-van Beurden PA, Von den Hoff JW. Zymographic techniques for the analysis of matrix metalloproteinases and their inhibitors. BioTechniques. 2005, 38 (1): 73–83. PMID 15679089 . doi:10.2144/05381RV01 ^ Doane WW. Amylase variants in Drosophila melanogaster: linkage studies and characterization of enzyme extracts. J Exp Zool. 1969, 171 (3): 31–41. PMID 5348624 . doi:10.1002/jez.1401710308 . ^ Lantz MS, Ciborowski P. Zymographic techniques for detection and characterization of microbial proteases. . Methods Enzymol. Methods in Enzymology. 1994, 235 : 563–594. ISBN 9780121821364PMID 8057927 . doi:10.1016/0076-6879(94)35171-6 . ^ 引用错误：没有为名为vandoorenetal2的参考文献提供内容 ^ 引用错误：没有为名为Hempelmann2的参考文献提供内容
酶谱法, 或酶谱, 英语, zymography, 是一种基于酶的底物库来检测水解酶的凝胶电泳技术, 使用三种类型的, 凝胶, 原位和体内中, 例如, 嵌入聚丙烯酰胺凝胶中的明胶将被凝胶中运行的活性明胶酶消化, 考马斯亮蓝染色后, 退化区域在深色染色背景下显示为清晰的条带, 诺氏疟原虫的天冬酰胺内肽酶印记, 酶谱一词的现代用法已经被用来定义发酵产品的研究和编目, 例如啤酒或葡萄酒, 通常由特定的酿酒师或在确定的发酵类别中进行, 例如使用特定的酵母菌株或细菌种类, 酶谱也指相关的发酵产品的集合, 被视为一个作品集, . 酶谱法或酶谱 英语 Zymography 是一种基于酶的底物库来检测水解酶的凝胶电泳技术 使用三种类型的酶谱法 凝胶酶谱法 原位酶谱法和体内酶谱法中 2 例如 嵌入聚丙烯酰胺凝胶中的明胶将被凝胶中运行的活性明胶酶消化 考马斯亮蓝染色后 退化区域在深色染色背景下显示为清晰的条带 3 诺氏疟原虫的天冬酰胺内肽酶印记 1 酶谱一词的现代用法已经被用来定义发酵产品的研究和编目 例如啤酒或葡萄酒 通常由特定的酿酒师或在确定的发酵类别中进行 例如使用特定的酵母菌株或细菌种类 酶谱也指相关的发酵产品的集合 被视为一个作品集 例如 特定啤酒厂生产的所有啤酒都可以统称为其酶谱 另见酶学 又称酶谱应用科学 酶学涉及发酵的生化过程 特别是酿造 酿酒和其他发酵食品中发酵酵母和细菌的选择 例如 啤酒酿造涉及应用顶部 淡啤酒 或底部发酵酵母 啤酒 以生产所需的各种啤酒 酵母的合成会影响啤酒的风味特征 即双乙酰 黄油 奶油糖果的味道或香气 目录 1 凝胶酶谱法 2 标准协议的变体 3 参见 4 参考资料凝胶酶谱法 编辑用于SDS PAGE的样品将在标准非还原加载缓冲液中制备 在这过程中不需要还原剂或将其煮沸 因为它们会干扰酶的重新折叠 在丙烯酰胺凝胶的制备过程中 将合适的底物 例如用于蛋白酶检测的明胶或酪蛋白 包埋在分离胶中 电泳后 通过在未缓冲的曲拉通X 100中孵育从而将凝胶 或酶谱 中的十二烷基硫酸钠去除 然后在适当的消化缓冲液中孵育 以便在37 C下的最佳时间长度孵育 随后对酶谱进行染色 通常使用氨基黑10B或考马斯亮蓝 消化区域显示为清晰的条带 而底物已被酶降解的则呈现深色染色背景 标准协议的变体 编辑标准方案可能需要根据样品酶进行修改 例如 黑腹果蝇消化糖苷酶通常在还原条件下 即存在2 巯基乙醇或二硫苏糖醇 以及在一定程度上加热条件下存活 事实上 加热到50 C后的分离往往会表现出条带分辨率的显着增加 而没有明显的活性损失 4 5 过去用于a 淀粉酶活性酶谱分析的常用方案也就是所谓的W W 多恩淀粉膜方案 这里运行天然PAGE凝胶以分离匀浆中的蛋白质 随后 将其中溶解 或更准确地说 悬浮 淀粉的薄凝胶覆盖在原始凝胶上一段时间 6 然后用卢戈氏碘液对淀粉染色 凝胶酶谱通常用于检测和分析微生物产生的酶 7 这导致了标准协议的变化 例如混合底物酶谱法 8 反向酶谱将底物和酶与丙烯酰胺共聚 可用于证明酶抑制剂的活性 染色后 抑制区域可视化为透明 或轻微染色 背景下的暗条带 在印记技术中 酶通过非变性凝胶电泳分离 凝胶置于底物处理过的洋菜上 9 酶谱法也可应用于其他类型的酶 包括木聚糖酶 脂肪酶和几丁质酶 参见 编辑SDS PAGE参考资料 编辑 Hempelmann E Putfarken B Rangachari K Wilson R J M Immunoprecipitation of malarial acid endopeptidase Parasitology 1986 92 2 305 312 PMID 3520446 doi 10 1017 S0031182000064076 Vandooren J Geurts N Martens E Van den Steen PE Opdenakker G Zymography methods for visualizing hydrolytic enzymes Nat Methods 2013 10 3 211 220 PMID 23443633 S2CID 5314901 doi 10 1038 nmeth 2371 Gelatin zymography protocol Abcam www abcam com 2017 05 12 英语 Martinez TF Alarcon FJ Diaz Lopez M Moyano FJ Improved detection of amylase activity by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis with copolymerized starch Electrophoresis 2000 21 14 2940 2943 PMID 11001307 doi 10 1002 1522 2683 20000801 21 14 lt 2940 AID ELPS2940 gt 3 0 CO 2 S Snoek van Beurden PA Von den Hoff JW Zymographic techniques for the analysis of matrix metalloproteinases and their inhibitors BioTechniques 2005 38 1 73 83 PMID 15679089 doi 10 2144 05381RV01 Doane WW Amylase variants in Drosophila melanogaster linkage studies and characterization of enzyme extracts J Exp Zool 1969 171 3 31 41 PMID 5348624 doi 10 1002 jez 1401710308 Lantz MS Ciborowski P Zymographic techniques for detection and characterization of microbial proteases Methods Enzymol Methods in Enzymology 1994 235 563 594 ISBN 9780121821364 PMID 8057927 doi 10 1016 0076 6879 94 35171 6 含有內容需登入查看的頁面 link 引用错误 没有为名为vandoorenetal2的参考文献提供内容 引用错误 没有为名为Hempelmann2的参考文献提供内容 取自 https zh wikipedia org w index php title 酶谱法 amp oldid 76405262, 维基百科，wiki ，书籍，书籍，图书馆，
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