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DAPI

十二月 27, 2023

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DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole），是一種能夠與DNA強力結合的螢光染料，常用於螢光顯微鏡觀測[1]。因為DAPI可以透過完整的細胞膜[2]，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。

DAPI
IUPAC名
2-(4-Amidinophenyl)-1H-indole-6-carboxamidine
别名 4',6-Diamidino-2-phenylindole
识别
CAS号 28718-90-3  Y
PubChem 2954
ChemSpider 2848
SMILES
 
  • [N@H]=C(N)c3ccc(c2cc1ccc(cc1n2)C(=[N@H])N)cc3
InChI
 
  • 1/C16H15N5/c17-15(18)10-3-1-9(2-4-10)13-7-11-5-6-12(16(19)20)8-14(11)21-13/h1-8,21H,(H3,17,18)(H3,19,20)
InChIKey FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYAH
ChEBI 51231
性质
化学式 C16H15N5
摩尔质量 277.32 g·mol−1
若非注明，所有数据均出自标准状态（25 ℃，100 kPa）下。

历史 编辑

1971年DAPI在一项关于制抗锥虫病（英语：Trypanosomiasis）的药物的研究中由Otto Dann的实验室首次合成，虽然它不是一种成功的药物，但更深入的研究表明它在与DNA强力结合时发出更强的荧光，因此在1975年它被用在超速离心分析法中以标记线粒体DNA。与DNA结合时激发的强荧光使它被广泛用于荧光显微镜技术中对DNA的染色。上世纪70年代末证实DAPI可以被用来在植物、微生物、多细胞动物和细菌[3]细胞中追踪DNA，1977年证实它可以被用来定量给细胞中的DNA染色，同时也证实DAPI可在流式细胞术中用作DNA染料。[4]

荧光属性 编辑

发射与吸收波长 编辑

在螢光顯微鏡觀察下，與雙股DNA結合的DAPI染劑在358 nm（紫外线）处有一个最大吸收峰，并在461 nm（蓝）处有一个最大发射峰，其發射光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色，因此在荧光显微技术中DAPI被紫外线照亮且被蓝或青色滤镜检出。DAPI也可以和RNA結合，但產生的螢光強度不及與DNA結合的結果，其發射光的波長範圍約在400 nm左右。[5][6][7]

DAPI的發射光為藍色，且DAPI和荧光素、綠色螢光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）或Texas Red染劑（紅色螢光染劑）的發射波長，僅有少部分重疊，研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進行多重螢光染色。如果需要十分精确的分析，可以使用光谱去混合（spectral unmixing）技術計算此一影响。

 
DAPI 结合于DNA小沟(蓝和绿). From PDB 1D30.

吸收模型 编辑

2013年，有研究者以含时密度泛函理论（英语：Time-dependent density functional theory）與等電位聚焦的连续极化介质模型（英语：Polarizable continuum model）描述了DAPI與DNA結合與發出螢光的機制，此一量子力学模型解释了DAPI與DNA結合後吸收與发射光譜的現象，與DNA的結合會使DAPI分子因位向限制導致幾何彈性降低，且周圍環境的極性甚低會導致DAPI分子的極性降低。[8]

用途 编辑

除了用于分析荧光显微法以外，DAPI也经常在细胞培养中被用于追踪侵染的支原体或病毒。在培养基上培养的支原体或病毒颗粒被DAPI染色后会发出荧光而易于追踪。[9]

DAPI也经常在流式细胞术中用于区分不同细胞周期时相的细胞。[10][11]

活细胞安全性 编辑

毒性 编辑

DAPI可用于固定细胞染色，但是因为活细胞染色对DAPI浓度有严格要求，它很少被用于活细胞染色。[12]虽然DAPI能快速進入活細胞中與DNA結合[2]，但是MSDS[13]和其他文献[2]认为DAPI没有毒性。

有研究表明，大剂量的DAPI可以导致小鼠中毒死亡,LD50= 基质 37.3 mg/kg。[14]

潜在的诱变性 编辑

DAPI被視為一種致癌物。尽管DAPI没有显现出对大腸桿菌的诱变性[15]，在机器制造商提供的信息上，DAPI被认为是一种DNA诱变剂[7]。由于DAPI可以掺入DNA螺旋中，它很可能具有底层的DNA诱变性，在使用過程中應注意配制、使用與拋棄的處理程序。

替代 编辑

 
以DAPI（蓝）與鬼笔环肽（红）染色的內皮細胞，另外綠色為與使用與异硫氰酸荧光素結合的抗體進行免疫荧光法（英语：Immunofluorescence）的結果

类似于DAPI技术，赫斯特染色是一种既可以用于活细胞也可以用于固定细胞的蓝色荧光染料[16]，并且可以使用与DAPI相同的机器滤镜设置。

参见 编辑

參考資料 编辑

  1. ^ 4',6-二脒基-2-苯基吲哚. 来邦网. [2010-01-21]. （原始内容于2010-01-24）. 
  2. ^ 2.0 2.1 2.2 徐锦堂; 王黎; 周清; 杨艳; 陈剑. CM_Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究_王黎.pdf. 2013 [2019-05-25]. doi:10.13389/j.cnki.rao.2013.11.001. （原始内容于2019-09-24）. 
  3. ^ M Cassan; E Boy; F Borne. Regulation of the lysine biosynthetic pathway in Escherichia coli K-12: isolation of a cis-dominant constitutive mutant for AK III synthesis.. J Bacteriol. 1975 Aug [2019-05-13]. PMID 238953. （原始内容于2019-09-24）. 
  4. ^ Kapuscinski J. DAPI: a DNA-specific fluorescent probe. Biotech Histochem. September 1995, 70 (5): 220–33. PMID 8580206. doi:10.3109/10520299509108199. 
  5. ^ Scott Prahl, DAPI （页面存档备份，存于互联网档案馆）. accessed 2009-12-08.
  6. ^ Kapuscinski J., [1] （页面存档备份，存于互联网档案馆）. accessed 2013-02-25.
  7. ^ 7.0 7.1 Invitrogen, DAPI Nucleic Acid Stain （页面存档备份，存于互联网档案馆）. accessed 2009-12-08.
  8. ^ A. Biancardi; T. Biver; F. Secco; B. Mennucci. An investigation of the photophysical properties of minor groove bound and intercalated DAPI through quantum-mechanical and spectroscopic tools.. Phys. Chem. Chem. Phys. 2013, 15: 4596. Bibcode:2013PCCP...15.4596B. doi:10.1039/C3CP44058C. 
  9. ^ RUSSELL, W. C.; NEWMAN, CAROL; WILLIAMSON, D. H. A simple cytochemical technique for demonstration of DNA in cells infected with mycoplasmas and viruses. Nature. 1975, 253 (5491): 461–462. Bibcode:1975Natur.253..461R. doi:10.1038/253461a0. 
  10. ^ Ashraf M. Khalil. . Science. 2012-06-01 [2019-05-11]. （原始内容存档于2021-05-26）. 
  11. ^ Kerenyi, Marc A; Shao, Zhen; Hsu, Yu-Jung; Guo, Guoji; Luc, Sidinh; O'Brien, Kassandra; Fujiwara, Yuko; Peng, Cong; Nguyen, Minh; Orkin, Stuart H. Histone demethylase Lsd1 represses hematopoietic stem and progenitor cell signatures during blood cell maturation. eLife. 2013-06-18, 2 (2013; 2) [2019-05-11]. PMID 23795291. doi:10.7554/eLife.00633. （原始内容于2019-09-24）. 
  12. ^ Zink D, Sadoni N, Stelzer E. Visualizing Chromatin and Chromosomes in Living Cells. Usually for the live cells staining Hoechst Staining is used. DAPI gives a higher signal in the fixed cells compare to Hoechst Stain but in the live cells Hoechst Stain is used.. Methods. 2003, 29 (1): 42–50. PMID 12543070. doi:10.1016/S1046-2023(02)00289-X. 
  13. ^ (PDF). [2018-04-18]. （原始内容 (PDF)存档于2016-03-03）. 
  14. ^ Slieger RF; et al. DAPI对鼠疟的治疗作用.pdf. 1980 [2019-05-25]. doi:10.13389/j.cnki.rao.2013.11.001. （原始内容于2019-09-24）. 
  15. ^ Ohta T, Tokishita S, Yamagata H. Ethidium bromide and SYBR Green I enhance the genotoxicity of UV-irradiation and chemical mutagens in E. coli.. Mutat. Res. 2001, 492 (1–2): 91–7. PMID 11377248. doi:10.1016/S1383-5718(01)00155-3. 
  16. ^ Latt, SA; Stetten, G; Juergens, LA; Willard, HF; Scher, CD. Recent developments in the detection of deoxyribonucleic acid synthesis by 33258 Hoechst fluorescence.. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. July 1975, 23 (7): 493–505. PMID 1095650. doi:10.1177/23.7.1095650. 

十二月 27, 2023
dapi, 关于与, 標題相近或相同的条目, 請見, 消歧義, 即4, 二脒基, 苯基吲哚, diamidino, phenylindole, 是一種能夠與dna強力結合的螢光染料, 常用於螢光顯微鏡觀測, 因為可以透過完整的細胞膜, 它可以用于活細胞和固定細胞的染色, iupac名2, amidinophenyl, indole, carboxamidine别名, diamidino, phenylindole识别cas号, 28718, ypubchem, 2954chemspider, 2848smiles,. 关于与 DAPI 標題相近或相同的条目 請見 DAPI 消歧義 DAPI即4 6 二脒基 2 苯基吲哚 4 6 diamidino 2 phenylindole 是一種能夠與DNA強力結合的螢光染料 常用於螢光顯微鏡觀測 1 因為DAPI可以透過完整的細胞膜 2 它可以用于活細胞和固定細胞的染色 DAPIIUPAC名2 4 Amidinophenyl 1H indole 6 carboxamidine别名 4 6 Diamidino 2 phenylindole识别CAS号 28718 90 3 YPubChem 2954ChemSpider 2848SMILES N H C N c3ccc c2cc1ccc cc1n2 C N H N cc3InChI 1 C16H15N5 c17 15 18 10 3 1 9 2 4 10 13 7 11 5 6 12 16 19 20 8 14 11 21 13 h1 8 21H H3 17 18 H3 19 20 InChIKey FWBHETKCLVMNFS UHFFFAOYAHChEBI 51231性质化学式 C16H15N5摩尔质量 277 32 g mol 1若非注明 所有数据均出自标准状态 25 100 kPa 下 目录 1 历史 2 荧光属性 2 1 发射与吸收波长 2 2 吸收模型 3 用途 4 活细胞安全性 4 1 毒性 4 2 潜在的诱变性 5 替代 6 参见 7 參考資料历史 编辑1971年DAPI在一项关于制抗锥虫病 英语 Trypanosomiasis 的药物的研究中由Otto Dann的实验室首次合成 虽然它不是一种成功的药物 但更深入的研究表明它在与DNA强力结合时发出更强的荧光 因此在1975年它被用在超速离心分析法中以标记线粒体DNA 与DNA结合时激发的强荧光使它被广泛用于荧光显微镜技术中对DNA的染色 上世纪70年代末证实DAPI可以被用来在植物 微生物 多细胞动物和细菌 3 细胞中追踪DNA 1977年证实它可以被用来定量给细胞中的DNA染色 同时也证实DAPI可在流式细胞术中用作DNA染料 4 荧光属性 编辑发射与吸收波长 编辑 在螢光顯微鏡觀察下 與雙股DNA結合的DAPI染劑在358 nm 紫外线 处有一个最大吸收峰 并在461 nm 蓝 处有一个最大发射峰 其發射光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色 因此在荧光显微技术中DAPI被紫外线照亮且被蓝或青色滤镜检出 DAPI也可以和RNA結合 但產生的螢光強度不及與DNA結合的結果 其發射光的波長範圍約在400 nm左右 5 6 7 DAPI的發射光為藍色 且DAPI和荧光素 綠色螢光蛋白 Green fluorescent protein GFP 或Texas Red染劑 紅色螢光染劑 的發射波長 僅有少部分重疊 研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進行多重螢光染色 如果需要十分精确的分析 可以使用光谱去混合 spectral unmixing 技術計算此一影响 nbsp DAPI 结合于DNA小沟 蓝和绿 From PDB 1D30 吸收模型 编辑 2013年 有研究者以含时密度泛函理论 英语 Time dependent density functional theory 與等電位聚焦的连续极化介质模型 英语 Polarizable continuum model 描述了DAPI與DNA結合與發出螢光的機制 此一量子力学模型解释了DAPI與DNA結合後吸收與发射光譜的現象 與DNA的結合會使DAPI分子因位向限制導致幾何彈性降低 且周圍環境的極性甚低會導致DAPI分子的極性降低 8 用途 编辑除了用于分析荧光显微法以外 DAPI也经常在细胞培养中被用于追踪侵染的支原体或病毒 在培养基上培养的支原体或病毒颗粒被DAPI染色后会发出荧光而易于追踪 9 DAPI也经常在流式细胞术中用于区分不同细胞周期时相的细胞 10 11 活细胞安全性 编辑毒性 编辑 DAPI可用于固定细胞染色 但是因为活细胞染色对DAPI浓度有严格要求 它很少被用于活细胞染色 12 虽然DAPI能快速進入活細胞中與DNA結合 2 但是MSDS 13 和其他文献 2 认为DAPI没有毒性 有研究表明 大剂量的DAPI可以导致小鼠中毒死亡 LD50 基质 37 3 mg kg 14 潜在的诱变性 编辑 DAPI被視為一種致癌物 尽管DAPI没有显现出对大腸桿菌的诱变性 15 在机器制造商提供的信息上 DAPI被认为是一种DNA诱变剂 7 由于DAPI可以掺入DNA螺旋中 它很可能具有底层的DNA诱变性 在使用過程中應注意配制 使用與拋棄的處理程序 替代 编辑 nbsp 以DAPI 蓝 與鬼笔环肽 红 染色的內皮細胞 另外綠色為與使用與异硫氰酸荧光素結合的抗體進行免疫荧光法 英语 Immunofluorescence 的結果类似于DAPI技术 赫斯特染色是一种既可以用于活细胞也可以用于固定细胞的蓝色荧光染料 16 并且可以使用与DAPI相同的机器滤镜设置 参见 编辑DAPI在PDB上的搜索结果 页面存档备份 存于互联网档案馆 參考資料 编辑 4 6 二脒基 2 苯基吲哚 来邦网 2010 01 21 原始内容存档于2010 01 24 2 0 2 1 2 2 徐锦堂 王黎 周清 杨艳 陈剑 CM Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究 王黎 pdf 2013 2019 05 25 doi 10 13389 j cnki rao 2013 11 001 原始内容存档于2019 09 24 M Cassan E Boy F Borne Regulation of the lysine biosynthetic pathway in Escherichia coli K 12 isolation of a cis dominant constitutive mutant for AK III synthesis J Bacteriol 1975 Aug 2019 05 13 PMID 238953 原始内容存档于2019 09 24 请检查 date 中的日期值 帮助 Kapuscinski J DAPI a DNA specific fluorescent probe Biotech Histochem September 1995 70 5 220 33 PMID 8580206 doi 10 3109 10520299509108199 Scott Prahl DAPI 页面存档备份 存于互联网档案馆 accessed 2009 12 08 Kapuscinski J 1 页面存档备份 存于互联网档案馆 accessed 2013 02 25 7 0 7 1 Invitrogen DAPI Nucleic Acid Stain 页面存档备份 存于互联网档案馆 accessed 2009 12 08 A Biancardi T Biver F Secco B Mennucci An investigation of the photophysical properties of minor groove bound and intercalated DAPI through quantum mechanical and spectroscopic tools Phys Chem Chem Phys 2013 15 4596 Bibcode 2013PCCP 15 4596B doi 10 1039 C3CP44058C RUSSELL W C NEWMAN CAROL WILLIAMSON D H A simple cytochemical technique for demonstration of DNA in cells infected with mycoplasmas and viruses Nature 1975 253 5491 461 462 Bibcode 1975Natur 253 461R doi 10 1038 253461a0 Ashraf M Khalil B Cell Signal Transduction in Germinal Center B Cells is Short Circuited by Increased Phosphatase Activity Science 2012 06 01 2019 05 11 原始内容存档于2021 05 26 Kerenyi Marc A Shao Zhen Hsu Yu Jung Guo Guoji Luc Sidinh O Brien Kassandra Fujiwara Yuko Peng Cong Nguyen Minh Orkin Stuart H Histone demethylase Lsd1 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acid synthesis by 33258 Hoechst fluorescence Journal of Histochemistry and Cytochemistry July 1975 23 7 493 505 PMID 1095650 doi 10 1177 23 7 1095650 取自 https zh wikipedia org w index php title DAPI amp oldid 74194287, 维基百科，wiki，书籍，书籍，图书馆，

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