布拉德福蛋白質定量法 （Bradford protein assay），亦稱作“考馬斯亮藍法”、“考馬斯藍染色法”（coomassie blue staining），為一種利用光譜學 技術分析溶液中蛋白質濃度的技術。本定量法會受待測胺基酸序列影響，此方法為Marion M. Bradford
原理 布拉德福蛋白質定量法為一種利用比色法 測定蛋白質濃度的化驗法。考馬斯亮藍G-250 在酸性環境下，會從紅色型態轉為藍色型態，並與蛋白質緊密結合。在形成這個複合物的過程中會經歷兩種反應：紅色態的考馬斯亮藍會先將其自由電子丟給蛋白質的可電離區，造成蛋白質構型改變，並暴露其疏水性 區段。於是蛋白質的三級結構會以凡得瓦力 與染劑結合。此外，染劑中的負電區會與蛋白質中的正電區相互結合，與蛋白質結合的考馬斯亮藍會因此穩定其藍色構型，造成溶液顏色改變，此時即可利用光譜儀 來測量此變化。
与蛋白结合之后的染料，在一段时间（2 分钟到 1 小时）之内，其吸收光谱图在 595 nm 处有一个最大吸收峰。[1] 阳离子 形态存在，显红色或者绿色；与蛋白结合之后，染料分子的阴离子 形态被稳定，显蓝色。染料的吸收光谱在 595 nm 处的吸收峰的增加，正比于结合了蛋白质的染料分子数目，故也正比于样品中蛋白质的数目（浓度）。
布拉德福蛋白質定量法与其它测量蛋白的方法不同，不容易受到蛋白质中其它化学成分的影响。
缺點 此蛋白质分析法会受几种洗涤剂和中性盐的干扰，如SDS，Triton。 结果也取决于所分析蛋白质中氨基酸的种类。
實驗方法 實驗器材 實驗步驟（標準分析，濃度：200-1500 µg/mL） 準備一純蛋白質（通常以牛血清蛋白）溶於0.15 M 氯化鈉溶液中，稀釋濃度為250、500、750和1500 µg/mL。並同時以同濃度稀釋待測蛋白質。 在每個試管加入 100 µL 的稀釋蛋白質 加入 5.0 mL 的考馬斯亮藍G-250到各試管並混合均勻。 將光譜儀波長調整至 595 nm，並以無蛋白質的一管作為基準。 5分鐘後測量各試管在 595 nm 下的吸光值 畫出標準曲線，計算其吸光係數，並推估蛋白濃度 實驗步驟（微量分析，濃度1-10 µg/mL)
替代化驗法 其他替代蛋白質化驗法還有：
紫外－可见分光光度法 双缩脲试剂 Lowry protein assay BCA protein assay Amido black protein assay
參考文獻 ^ Bradford, M. Marion. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 1976, 72 (1-2): 248-254 [2015-04-16 ] . PMID 942051 . doi:10.1016/0003-2697(76)90527-3 . （原始内容于2019-06-14）. Zor, T.; Selinger, Z., Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies, Anal. Biochem., 1996, 236 : 302–308, PMID 8660509 , doi:10.1006/abio.1996.0171 Noble, J.E.; Bailey, M.J.A., Quantitation of Protein, Methods Enzymol., 2009, 463 : 73–95, doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1 Albright, Brian, Mathematical Modeling with Excel: 60, 2009, ISBN 978-0763765668 Stephenson, Frank Harold, Calculations for molecular biology and biotechnology: a guide to mathematics in the laboratory: 252, 2003, ISBN 0126657513 Dennison, Clive, A guide to protein isolation, Focus on structural biology, 2003, 3 : 39, ISBN 1402012241 Ibanez, Jorge G., Environmental chemistry: fundamentals: 60, 2007, ISBN 0387260617
外部連結 Bradford assay chemistry （页面存档备份，存于互联网档案馆 ） Variable Pathlength Spectroscopy （页面存档备份，存于互联网档案馆 ） OpenWetWare （页面存档备份，存于互联网档案馆 ）
布拉德福蛋白質定量法, bradford, protein, assay, 亦稱作, 考馬斯亮藍法, 考馬斯藍染色法, coomassie, blue, staining, 為一種利用光譜學技術分析溶液中蛋白質濃度的技術, 本定量法會受待測胺基酸序列影響, 此方法為marion, bradford, 英语, marion, bradford, 醫生所開發, 目录, 原理, 缺點, 實驗方法, 實驗器材, 實驗步驟, 標準分析, 濃度, 1500, 實驗步驟, 微量分析, 濃度1, 替代化驗法, 參考文獻, 外部連結. 布拉德福蛋白質定量法 Bradford protein assay 亦稱作 考馬斯亮藍法 考馬斯藍染色法 coomassie blue staining 為一種利用光譜學技術分析溶液中蛋白質濃度的技術 本定量法會受待測胺基酸序列影響 此方法為Marion M Bradford 英语 Marion M Bradford 醫生所開發 目录 1 原理 2 缺點 3 實驗方法 3 1 實驗器材 3 2 實驗步驟 標準分析 濃度 200 1500 µg mL 3 3 實驗步驟 微量分析 濃度1 10 µg mL 4 替代化驗法 5 參考文獻 6 外部連結原理 编辑 左 布拉德福溶液右 布拉德福溶液 溶菌酶 布拉德福蛋白質定量法為一種利用比色法測定蛋白質濃度的化驗法 考馬斯亮藍G 250在酸性環境下 會從紅色型態轉為藍色型態 並與蛋白質緊密結合 在形成這個複合物的過程中會經歷兩種反應 紅色態的考馬斯亮藍會先將其自由電子丟給蛋白質的可電離區 造成蛋白質構型改變 並暴露其疏水性區段 於是蛋白質的三級結構會以凡得瓦力與染劑結合 此外 染劑中的負電區會與蛋白質中的正電區相互結合 與蛋白質結合的考馬斯亮藍會因此穩定其藍色構型 造成溶液顏色改變 此時即可利用光譜儀來測量此變化 与蛋白结合之后的染料 在一段时间 2 分钟到 1 小时 之内 其吸收光谱图在 595 nm 处有一个最大吸收峰 1 染料在与蛋白结合前 以阳离子形态存在 显红色或者绿色 与蛋白结合之后 染料分子的阴离子形态被稳定 显蓝色 染料的吸收光谱在 595 nm 处的吸收峰的增加 正比于结合了蛋白质的染料分子数目 故也正比于样品中蛋白质的数目 浓度 布拉德福蛋白質定量法与其它测量蛋白的方法不同 不容易受到蛋白质中其它化学成分的影响 缺點 编辑此章节需要扩充 2017年10月27日 此蛋白质分析法会受几种洗涤剂和中性盐的干扰 如SDS Triton 结果也取决于所分析蛋白质中氨基酸的种类 實驗方法 编辑實驗器材 编辑 0 15 M 氯化鈉 微量吸管實驗步驟 標準分析 濃度 200 1500 µg mL 编辑 準備一純蛋白質 通常以牛血清蛋白 溶於0 15 M 氯化鈉溶液中 稀釋濃度為250 500 750和1500 µg mL 並同時以同濃度稀釋待測蛋白質 在每個試管加入 100 µL 的稀釋蛋白質 加入 5 0 mL 的考馬斯亮藍G 250到各試管並混合均勻 將光譜儀波長調整至 595 nm 並以無蛋白質的一管作為基準 5分鐘後測量各試管在 595 nm 下的吸光值 畫出標準曲線 計算其吸光係數 並推估蛋白濃度實驗步驟 微量分析 濃度1 10 µg mL 编辑替代化驗法 编辑其他替代蛋白質化驗法還有 紫外 可见分光光度法 双缩脲试剂 Lowry protein assay BCA protein assay Amido black protein assay參考文獻 编辑 Bradford M Marion A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding Analytical Biochemistry 1976 72 1 2 248 254 2015 04 16 PMID 942051 doi 10 1016 0003 2697 76 90527 3 原始内容存档于2019 06 14 Zor T Selinger Z Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity theoretical and experimental studies Anal Biochem 1996 236 302 308 PMID 8660509 doi 10 1006 abio 1996 0171 Noble J E Bailey M J A Quantitation of Protein Methods Enzymol 2009 463 73 95 doi 10 1016 S0076 6879 09 63008 1 Albright Brian Mathematical Modeling with Excel 60 2009 ISBN 978 0763765668 Stephenson Frank Harold Calculations for molecular biology and biotechnology a guide to mathematics in the laboratory 252 2003 ISBN 0126657513 Dennison Clive A guide to protein isolation Focus on structural biology 2003 3 39 ISBN 1402012241 Ibanez Jorge G Environmental chemistry fundamentals 60 2007 ISBN 0387260617 外部連結 编辑Bradford assay chemistry 页面存档备份 存于互联网档案馆 Variable Pathlength Spectroscopy 页面存档备份 存于互联网档案馆 OpenWetWare 页面存档备份 存于互联网档案馆 取自 https zh wikipedia org w index php title 布拉德福蛋白質定量法 amp oldid 68248337, 维基百科，wiki ，书籍，书籍，图书馆，
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