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Vero細胞

二月 18, 2023

Vero細胞亦稱綠猴腎細胞[1]，是一種非整倍性的非洲綠猴（屬名：Chlorocebus）腎細胞系，最初由日本千葉大學的安村美博於1962年3月27日，分離自正常成年非洲綠猴的腎臟上皮細胞[2]。「vero」即「verda reno」的縮寫，其中「verda reno」在世界語中有「綠色的腎臟」的意思，而「vero」則在世界語中表示「真相」[3] 。

在綠燈下放大了100倍的Vero細胞

特徵

Vero細胞是連續的非整倍性細胞系，這意味着它的染色體數目異常，而且已知連續的細胞系可以通過許多分裂週期，不會老化，Vero細胞的干擾素分泌出現缺陷。它們與正常的哺乳動物細胞不同，在被病毒感染時不會分泌干擾素α/β[4]。然而，它們仍然具有干擾素-α/β受體（英语：Interferon-alpha/beta receptor）（IFNAR），因此當將重組干擾素添加到其培養基中時，它們仍然可以作出反應。

Sun等合成了五種不同尺寸的草酸鈣（COM）晶體，包括50 nm、200 nm、1 μm、3 μm、10 μm，並且比較這五種尺寸的草酸鈣晶體對Vero細胞的損傷差異[5][6]。實驗結果表明，COM的尺寸和聚集程度是影響晶體細胞毒性的重要原因，而細胞對晶體的內吞方式與晶體尺寸存在密切的關係[5]。Vero細胞內吞50nm和100 nm的COM晶體主要以網格蛋白介導的途徑，內吞1 μm的COM晶體則主要以巨胞飲（macropinocytosis）的形式進行內吞作用，而Vero細胞難以內吞尺寸更大的微米晶體[7]。

2014年，有日本的研究人員確定Vero細胞的整個基因組序列[8]。Vero細胞的12號染色體具有純合的〜9-Mb缺失，導致基因組中I型干擾素基因簇和細胞週期蛋白依賴性激酶抑製劑CDKN2A（英语：CDKN2A）和CDKN2B（英语：CDKN2B）的丟失[8]。儘管非洲綠猴先前被歸類為草原猴（Cercopithecus aethiops），但是它們已經被歸類為綠猴屬（Chlorocebus）[9]。有基因組分析表明，Vero細胞源自雌性綠猴（Chlorocebus sabaeus）[8]。

細胞培養

Vero細胞在傳代培養時的生長狀況良好，並且發現細胞膜界線清晰和胞漿透明度較好的現象。Vero細胞的形態較為完整，細胞增殖的速度較快。Vero細胞傳代後的第三天開始形成單層，傳代細胞在第七天形成致密單層，此種致密單層在連續培養第十二天後逐漸老化，細胞在第十六天開始從培養瓶壁上脫落[10]。

Vero細胞在轉瓶後，可以在細胞培養二十四小時後出現貼壁，細胞在培養三天後可以達到相對靜止期，細胞培養的第五天可以長成單層，細胞培養到第十二天時發現其生長致密，而細胞培養至第十四天時則開始出現老化。轉瓶後的細胞生長速度比轉瓶前緩慢，然而單層細胞持續的時間比轉瓶前更持久。進行支原體檢查時未發現有支原體的生長及污染。細胞型分析結果表明Vero 細胞的核型沒有發現明顯的異常之處，而染色體數目也沒有明顯變化[10]。

研究用途

Vero細胞可以用於多種研究用途。Vero細胞在建立後不久，就被發現對多種類型的病毒高度敏感，其中包括猿猴空泡病毒40[11]、麻疹病毒[12]、風疹病毒（英语：Rubella virus）[13]、節足動物攜帶性病毒（英语：Arbovirus）[14]及腺病毒[15]等。後來被發現也容易感染細菌毒素，包括白喉毒素（英语：Diphtheria toxin）[16]、不耐熱腸毒素（heat-labile enterotoxins）[17]和志賀氏樣毒素[18][19]等。

Vero細胞可以篩選大腸埃希氏菌的毒素。在Vero細胞被建立後，這些毒素亦可以稱為「Vero毒素」。由於與痢疾志賀氏菌（英语：Shigella dysenteriae）（Shigella dysenteriae）分離出的志賀氏毒素（英语：Shiga toxin）相似，因此後來被稱為志賀氏樣毒素（Shiga-like toxin）[8]。

Vero細胞又可以作為錐蟲目（英语：Trypanosomatida）等真核寄生蟲的宿主細胞[8]。此外，Vero細胞被廣泛應用於病毒感染分子機制研究、疫苗及重組蛋白的生產[20][21][22]，世界衛生組織甚至認可其作為疫苗生產細胞系，建議將其作為流感疫苗生產的替代基質。目前已知Vero細胞可以協助生產狂犬病[23]及水貂犬瘟熱等疫苗[24]，而用Vero細胞培養的流感疫苗可以更好地介導人體產生對流感的免疫應答[25]。

豬流行性腹瀉病毒

Hofmann等通過在培養基中添加胰蛋白酶，證實豬流行性腹瀉病毒（PEDV）除了能夠在天然宿主的初始靶細胞（英语：Codocyte）上增殖外，還可以在Vero細胞中增殖。同時又發現胰蛋白酶對PEDV纖突糖蛋白的切割作用，增強病毒對Vero細胞的感染力[26]。Ye等通過構建穩定表達PEDV ORF3蛋白的Vero細胞，發現ORF3蛋白能夠促進PEDV的增殖[27]。然而有研究顯示不同的結果，例如Chen等發現orf3基因轉譯的提前終止，有利於PEDV適應Vero細胞，並且可以提高其在Vero細胞上的複製能力[28]；而Sun等對非胰蛋白酶依賴PEDV 85-7的Vero細胞的研究表明，PEDV的複製並沒有被orf3基因的突變或轉譯的提前終止顯著影響[29]。另外，Li等構建缺失orf3基因的重組PEDV，發現orf3基因缺失株和攜有全長orf3基因的重組病毒，在Vero細胞上的滴度相同，故而推測orf3基因不影響其在Vero細胞上的增殖[30]。

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二月 18, 2023
vero細胞, 亦稱綠猴腎細胞, 是一種非整倍性的非洲綠猴, 屬名, chlorocebus, 腎細胞系, 最初由日本千葉大學的安村美博於1962年3月27日, 分離自正常成年非洲綠猴的腎臟上皮細胞, vero, verda, reno, 的縮寫, 其中, verda, reno, 在世界語中有, 綠色的腎臟, 的意思, vero, 則在世界語中表示, 真相, 在綠燈下放大了100倍的, 目录, 特徵, 細胞培養, 研究用途, 豬流行性腹瀉病毒, 参考文献, 外部連結特徵, 编辑是連續的非整倍性細胞系, 這意味着它. Vero細胞亦稱綠猴腎細胞 1 是一種非整倍性的非洲綠猴 屬名 Chlorocebus 腎細胞系 最初由日本千葉大學的安村美博於1962年3月27日 分離自正常成年非洲綠猴的腎臟上皮細胞 2 vero 即 verda reno 的縮寫 其中 verda reno 在世界語中有 綠色的腎臟 的意思 而 vero 則在世界語中表示 真相 3 在綠燈下放大了100倍的Vero細胞 目录 1 特徵 1 1 細胞培養 2 研究用途 2 1 豬流行性腹瀉病毒 3 参考文献 4 外部連結特徵 编辑Vero細胞是連續的非整倍性細胞系 這意味着它的染色體數目異常 而且已知連續的細胞系可以通過許多分裂週期 不會老化 Vero細胞的干擾素分泌出現缺陷 它們與正常的哺乳動物細胞不同 在被病毒感染時不會分泌干擾素a b 4 然而 它們仍然具有干擾素 a b受體 英语 Interferon alpha beta receptor IFNAR 因此當將重組干擾素添加到其培養基中時 它們仍然可以作出反應 Sun等合成了五種不同尺寸的草酸鈣 COM 晶體 包括50 nm 200 nm 1 mm 3 mm 10 mm 並且比較這五種尺寸的草酸鈣晶體對Vero細胞的損傷差異 5 6 實驗結果表明 COM的尺寸和聚集程度是影響晶體細胞毒性的重要原因 而細胞對晶體的內吞方式與晶體尺寸存在密切的關係 5 Vero細胞內吞50nm和100 nm的COM晶體主要以網格蛋白介導的途徑 內吞1 mm的COM晶體則主要以巨胞飲 macropinocytosis 的形式進行內吞作用 而Vero細胞難以內吞尺寸更大的微米晶體 7 2014年 有日本的研究人員確定Vero細胞的整個基因組序列 8 Vero細胞的12號染色體具有純合的 9 Mb缺失 導致基因組中I型干擾素基因簇和細胞週期蛋白依賴性激酶抑製劑CDKN2A 英语 CDKN2A 和CDKN2B 英语 CDKN2B 的丟失 8 儘管非洲綠猴先前被歸類為草原猴 Cercopithecus aethiops 但是它們已經被歸類為綠猴屬 Chlorocebus 9 有基因組分析表明 Vero細胞源自雌性綠猴 Chlorocebus sabaeus 8 細胞培養 编辑 Vero細胞在傳代培養時的生長狀況良好 並且發現細胞膜界線清晰和胞漿透明度較好的現象 Vero細胞的形態較為完整 細胞增殖的速度較快 Vero細胞傳代後的第三天開始形成單層 傳代細胞在第七天形成致密單層 此種致密單層在連續培養第十二天後逐漸老化 細胞在第十六天開始從培養瓶壁上脫落 10 Vero細胞在轉瓶後 可以在細胞培養二十四小時後出現貼壁 細胞在培養三天後可以達到相對靜止期 細胞培養的第五天可以長成單層 細胞培養到第十二天時發現其生長致密 而細胞培養至第十四天時則開始出現老化 轉瓶後的細胞生長速度比轉瓶前緩慢 然而單層細胞持續的時間比轉瓶前更持久 進行支原體檢查時未發現有支原體的生長及污染 細胞型分析結果表明Vero 細胞的核型沒有發現明顯的異常之處 而染色體數目也沒有明顯變化 10 研究用途 编辑Vero細胞可以用於多種研究用途 Vero細胞在建立後不久 就被發現對多種類型的病毒高度敏感 其中包括猿猴空泡病毒40 11 麻疹病毒 12 風疹病毒 英语 Rubella virus 13 節足動物攜帶性病毒 英语 Arbovirus 14 及腺病毒 15 等 後來被發現也容易感染細菌毒素 包括白喉毒素 英语 Diphtheria toxin 16 不耐熱腸毒素 heat labile enterotoxins 17 和志賀氏樣毒素 18 19 等 Vero細胞可以篩選大腸埃希氏菌的毒素 在Vero細胞被建立後 這些毒素亦可以稱為 Vero毒素 由於與痢疾志賀氏菌 英语 Shigella dysenteriae Shigella dysenteriae 分離出的志賀氏毒素 英语 Shiga toxin 相似 因此後來被稱為志賀氏樣毒素 Shiga like toxin 8 Vero細胞又可以作為錐蟲目 英语 Trypanosomatida 等真核寄生蟲的宿主細胞 8 此外 Vero細胞被廣泛應用於病毒感染分子機制研究 疫苗及重組蛋白的生產 20 21 22 世界衛生組織甚至認可其作為疫苗生產細胞系 建議將其作為流感疫苗生產的替代基質 目前已知Vero細胞可以協助生產狂犬病 23 及水貂犬瘟熱等疫苗 24 而用Vero細胞培養的流感疫苗可以更好地介導人體產生對流感的免疫應答 25 豬流行性腹瀉病毒 编辑 Hofmann等通過在培養基中添加胰蛋白酶 證實豬流行性腹瀉病毒 PEDV 除了能夠在天然宿主的初始靶細胞 英语 Codocyte 上增殖外 還可以在Vero細胞中增殖 同時又發現胰蛋白酶對PEDV纖突糖蛋白的切割作用 增強病毒對Vero細胞的感染力 26 Ye等通過構建穩定表達PEDV ORF3蛋白的Vero細胞 發現ORF3蛋白能夠促進PEDV的增殖 27 然而有研究顯示不同的結果 例如Chen等發現orf3基因轉譯的提前終止 有利於PEDV適應Vero細胞 並且可以提高其在Vero細胞上的複製能力 28 而Sun等對非胰蛋白酶依賴PEDV 85 7的Vero細胞的研究表明 PEDV的複製並沒有被orf3基因的突變或轉譯的提前終止顯著影響 29 另外 Li等構建缺失orf3基因的重組PEDV 發現orf3基因缺失株和攜有全長orf3基因的重組病毒 在Vero細胞上的滴度相同 故而推測orf3基因不影響其在Vero細胞上的增殖 30 参考文献 编辑 存档副本 2021 06 24 原始内容存档于2021 06 24 Yasumura Y Kawakita M The research for the SV40 by means of tissue culture technique Nippon Rinsho 1963 21 6 1201 1219 2020 02 22 原始内容存档于2021 02 17 Shimizu B Seno K Koyama H Kuroki T 编 Manual of selected cultured cell lines for bioscience and biotechnology Tokyo Kyoritsu Shuppan 1993 299 300 2020 02 22 ISBN 978 4 320 05386 1 原始内容存档于2021 02 17 日语 Desmyter J Melnick J L Rawls W E Defectiveness of interferon production and of rubella virus interference in a line of African green monkey kidney cells Vero Journal of Virology 1968 10 XX 2 10 955 961 2021 05 09 ISSN 0022 538X PMC 375423 PMID 4302013 doi 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