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轉染

轉染(英語:Transfection)是刻意將外源遺傳物質(DNARNA,裸核酸或纯化核酸)植入真核細胞的一種過程;此術語用來描述非病毒媒介的基因轉殖方式,以及動物細胞進展到癌變狀態。轉化(英語:transformation,又譯“轉形”)則更常用於細菌和植物细胞中的非病毒DNA轉移。而以病毒媒介的基因轉殖至真核細胞的方式,則稱為轉導(英語:Transduction)。

動物細胞的轉染作用方式如下,在細胞膜上開出一個暫時性的小孔,使細胞較容易攝取外源基因(可經由磷酸鈣攜帶進入細胞),藉由電穿孔法、細胞擠壓法即可製造孔洞、或將細胞及外源基因浸泡在充滿脂質體的液體中,脂質體將會包住外源基因,然後融入細胞膜,並將外源基因釋放到細胞內部。

轉導有時會導致目標基因產生意想不到的轉變。

方法

以下有許多轉染的方式,有些為物理方法(電穿孔法、細胞擠壓法、奈米粒子以及磁轉),有些需求化學物質或是病毒作為攜帶者。

化學性的轉染

化學性的轉染可被分為下列幾類:環糊精聚合物、脂質體、奈米粒子。

  • 利用磷酸鈣作為攜帶者是最便宜的化學方法之一,此方法是由F. L. Graham和A. J. van der Eb在西元1973年所提出,此方式需要兩種試劑:帶有磷酸根的HEPES緩衝溶液(HeBS)及帶有外源DNA的氯化鈣溶液,當將這兩種溶液混合均勻,帶正電的離子將會和帶負電的磷酸跟結合形成磷酸鈣,而外源DNA則會鍵結在磷酸鈣的表面上,此懸浮物接著被加到細胞培養皿中(通常以單層生長的細胞培養皿),細胞將會攝取外源DNA(科學家尚未了解其過程),醫學上常利用此方法來檢測癌細胞。
  • 其他方法使用具多側链的有機化合物,所謂樹枝狀聚合物,結合DNA並讓它進入細胞內。
  • 一個非常有效的方法是加入具有外源DNA的脂質體,脂質體為一小型、球狀、單層膜的脂肪構造,內部可以包住外源DNA。當脂質體被放入細胞中,將會融入細胞膜,從而將內部的外源DNA釋放進入細胞中,對於真核動物細胞而言,使用陽離子的脂質體將能有效地增加轉染成功率,因為真核動物細胞對此類脂質體有更高的敏感性。
  • 另一種方法是採用陽離子聚合物,如DEAE-葡聚醣或聚乙烯亞胺。帶負電荷的DNA將結合到聚陽離子上,再由細胞行胞吞作用攝取。

非化學性的轉染

  • 電穿孔法(又稱基因電轉移)是一種常見的方法,當細胞暴露於強電場造成的短脈衝中,細胞膜的通透性會在瞬時增加,使細胞能攝取外源基因。
  • 細胞擠壓法是由Armon Sharei、Robert Langer和Klavs Jensen於2013年在麻省理工學院所提出,他們透過溫和的壓縮細胞膜,使細胞膜上的通透性變高,從而達到攝取外源基因的目的,此方法消除了外源毒性及脫靶效應的可能性,因為它並不需要外加的化學藥劑及電場。
  • 聲孔效應採用高強度的超音波誘導細胞膜上小孔的形成。這個孔的形成主要歸因於氣泡與附近的細胞膜相互作用。

參考資料

  • " " at Dorland's Medical Dictionary

轉染, 英語, transfection, 是刻意將外源遺傳物質, dna或rna, 裸核酸或纯化核酸, 植入真核細胞的一種過程, 此術語用來描述非病毒媒介的基因轉殖方式, 以及動物細胞進展到癌變狀態, 轉化, 英語, transformation, 又譯, 轉形, 則更常用於細菌和植物细胞中的非病毒dna轉移, 而以病毒媒介的基因轉殖至真核細胞的方式, 則稱為轉導, 英語, transduction, 動物細胞的作用方式如下, 在細胞膜上開出一個暫時性的小孔, 使細胞較容易攝取外源基因, 可經由磷酸鈣攜帶進入細胞. 轉染 英語 Transfection 是刻意將外源遺傳物質 DNA或RNA 裸核酸或纯化核酸 植入真核細胞的一種過程 此術語用來描述非病毒媒介的基因轉殖方式 以及動物細胞進展到癌變狀態 轉化 英語 transformation 又譯 轉形 則更常用於細菌和植物细胞中的非病毒DNA轉移 而以病毒媒介的基因轉殖至真核細胞的方式 則稱為轉導 英語 Transduction 動物細胞的轉染作用方式如下 在細胞膜上開出一個暫時性的小孔 使細胞較容易攝取外源基因 可經由磷酸鈣攜帶進入細胞 藉由電穿孔法 細胞擠壓法即可製造孔洞 或將細胞及外源基因浸泡在充滿脂質體的液體中 脂質體將會包住外源基因 然後融入細胞膜 並將外源基因釋放到細胞內部 轉導有時會導致目標基因產生意想不到的轉變 目录 1 方法 1 1 化學性的轉染 1 2 非化學性的轉染 2 參考資料方法 编辑以下有許多轉染的方式 有些為物理方法 電穿孔法 細胞擠壓法 奈米粒子以及磁轉 有些需求化學物質或是病毒作為攜帶者 化學性的轉染 编辑 化學性的轉染可被分為下列幾類 環糊精 聚合物 脂質體 奈米粒子 利用磷酸鈣作為攜帶者是最便宜的化學方法之一 此方法是由F L Graham和A J van der Eb在西元1973年所提出 此方式需要兩種試劑 帶有磷酸根的HEPES緩衝溶液 HeBS 及帶有外源DNA的氯化鈣溶液 當將這兩種溶液混合均勻 帶正電的鈣離子將會和帶負電的磷酸跟結合形成磷酸鈣 而外源DNA則會鍵結在磷酸鈣的表面上 此懸浮物接著被加到細胞培養皿中 通常以單層生長的細胞培養皿 細胞將會攝取外源DNA 科學家尚未了解其過程 醫學上常利用此方法來檢測癌細胞 其他方法使用具多側链的有機化合物 所謂樹枝狀聚合物 結合DNA並讓它進入細胞內 一個非常有效的方法是加入具有外源DNA的脂質體 脂質體為一小型 球狀 單層膜的脂肪構造 內部可以包住外源DNA 當脂質體被放入細胞中 將會融入細胞膜 從而將內部的外源DNA釋放進入細胞中 對於真核動物細胞而言 使用陽離子的脂質體將能有效地增加轉染成功率 因為真核動物細胞對此類脂質體有更高的敏感性 另一種方法是採用陽離子聚合物 如DEAE 葡聚醣或聚乙烯亞胺 帶負電荷的DNA將結合到聚陽離子上 再由細胞行胞吞作用攝取 非化學性的轉染 编辑 電穿孔法 又稱基因電轉移 是一種常見的方法 當細胞暴露於強電場造成的短脈衝中 細胞膜的通透性會在瞬時增加 使細胞能攝取外源基因 細胞擠壓法是由Armon Sharei Robert Langer和Klavs Jensen於2013年在麻省理工學院所提出 他們透過溫和的壓縮細胞膜 使細胞膜上的通透性變高 從而達到攝取外源基因的目的 此方法消除了外源毒性及脫靶效應的可能性 因為它並不需要外加的化學藥劑及電場 聲孔效應採用高強度的超音波誘導細胞膜上小孔的形成 這個孔的形成主要歸因於氣泡與附近的細胞膜相互作用 參考資料 编辑https web archive org web 20100810014640 http www promega com paguide chap12 htm https web archive org web 20090616022448 http www mercksource com pp us cns cns hl dorlands split jsp pg 2Fppdocs 2Fus 2Fcommon 2Fdorlands 2Fdorland 2Feight 2F000110186 htm at Dorland s Medical Dictionary 取自 https zh wikipedia org w index php title 轉染 amp oldid 73839815, 维基百科,wiki,书籍,书籍,图书馆,

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