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遞減聚合酶鏈式反應

遞減PCR,亦稱降落PCR(英語:touchdown PCR)是一種PCR(聚合酶鏈式反應)方法,用來避免非特異性序列的擴增。PCR中引物的黏合溫度(annealing temperature)決定了黏合的特異性,溫度越高特異性越強,但過高則不能實現引物和模板的結合,而過低會產生大量非特異性產物。因此進行PCR時需要尋找合適的黏合溫度。

遞減PCR開始先設定一個比較高的黏合溫度,每個循環黏合溫度下降1℃,到一個較低溫度以後每個循環的黏合溫度保持不變直到結束。在剛下降到特異性結合可以進行的最高溫度時,可以達到最高的特異性。這樣在起初的幾個循環中,特異性擴增序列可以相對非特異性序列多擴增若干倍,從而減輕非特異性擴增對結果的干擾。這種方法可用於省去多次試驗最佳黏合溫度的工作。

此外,遞減PCR還可與簡併引物degenerate primer)結合使用,用來推出一段已知肽鏈氨基酸序列所對應的DNA鹼基序列。

參考文獻 编辑

  • Don R, Cox P, Wainwright B, Baker K, Mattick J. 'Touchdown' PCR to circumvent spurious priming during gene amplification. Nucleic Acids Res. 1991, 19 (14): 4008. PMC 328507 . PMID 1861999. doi:10.1093/nar/19.14.4008. 
  • Roux K. Using mismatched primer-template pairs in touchdown PCR. Biotechniques. 1994, 16 (5): 812–4. PMID 8068332. 
  • Hecker K, Roux K. High and low annealing temperatures increase both specificity and yield in touchdown and stepdown PCR. Biotechniques. 1996, 20 (3): 478–85. PMID 8679209. 

遞減聚合酶鏈式反應, 遞減pcr, 亦稱降落pcr, 英語, touchdown, 是一種pcr, 聚合酶鏈式反應, 方法, 用來避免非特異性序列的擴增, pcr中引物的黏合溫度, annealing, temperature, 決定了黏合的特異性, 溫度越高特異性越強, 但過高則不能實現引物和模板的結合, 而過低會產生大量非特異性產物, 因此進行pcr時需要尋找合適的黏合溫度, 遞減pcr開始先設定一個比較高的黏合溫度, 每個循環黏合溫度下降1, 到一個較低溫度以後每個循環的黏合溫度保持不變直到結束, 在剛下降到. 遞減PCR 亦稱降落PCR 英語 touchdown PCR 是一種PCR 聚合酶鏈式反應 方法 用來避免非特異性序列的擴增 PCR中引物的黏合溫度 annealing temperature 決定了黏合的特異性 溫度越高特異性越強 但過高則不能實現引物和模板的結合 而過低會產生大量非特異性產物 因此進行PCR時需要尋找合適的黏合溫度 遞減PCR開始先設定一個比較高的黏合溫度 每個循環黏合溫度下降1 到一個較低溫度以後每個循環的黏合溫度保持不變直到結束 在剛下降到特異性結合可以進行的最高溫度時 可以達到最高的特異性 這樣在起初的幾個循環中 特異性擴增序列可以相對非特異性序列多擴增若干倍 從而減輕非特異性擴增對結果的干擾 這種方法可用於省去多次試驗最佳黏合溫度的工作 此外 遞減PCR還可與簡併引物 degenerate primer 結合使用 用來推出一段已知肽鏈的氨基酸序列所對應的DNA鹼基序列 參考文獻 编辑Don R Cox P Wainwright B Baker K Mattick J Touchdown PCR to circumvent spurious priming during gene amplification Nucleic Acids Res 1991 19 14 4008 PMC 328507 nbsp PMID 1861999 doi 10 1093 nar 19 14 4008 Roux K Using mismatched primer template pairs in touchdown PCR Biotechniques 1994 16 5 812 4 PMID 8068332 Hecker K Roux K High and low annealing temperatures increase both specificity and yield in touchdown and stepdown PCR Biotechniques 1996 20 3 478 85 PMID 8679209 取自 https zh wikipedia org w index php title 遞減聚合酶鏈式反應 amp oldid 52005910, 维基百科,wiki,书籍,书籍,图书馆,

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