組氨酸標籤（英語：Polyhistidine-tag，或 hexa histidine-tag, 6xHis-tag, His6 tag）是由連續六個以上的組氨酸所組合而成的一段氨基酸序列。最初為Roche公司發明[1]，帶有組氨酸標籤的质粒則為Qiagen所有，由於原始的專利保護已經過期，故不論學術或商業皆可免費使用。一般而言，科學家藉由基因工程將此標籤放置於重組蛋白質的N端、C端或兩端。
應用 编辑
蛋白質純化 编辑
以大腸桿菌或其他原核生物表現的重組蛋白會累積在細胞質中，為了取得重組蛋白，以物理性的方式如高壓，或生物性的方式如溶菌酶，或兩種方式合併使用去破壞細胞膜，使得重組蛋白懸浮於緩衝溶液中。此時要將重組蛋白從許許多多細菌的蛋白質中分離出來並不容易，但若重組蛋白帶有組氨酸標籤，則利用親和性層析即可有效的進行純化。
市面上常見的組氨酸標籤親和性層析法，是利用瓊脂糖(Agarose)為膠體的基底(resin beads)，在瓊脂糖上修飾螯合劑亞氨基二乙酸(iminodiacetic acid, IDA)或氨三乙酸(nitrilotriacetic acid, NTA)，此時膠體即可螯合二價或三價的金屬離子，例如鎳離子、鈷離子、銅離子及鐵離子。組氨酸標籤親和性層析膠體最常搭配的二價離子為鎳離子，螯合上鎳離子的膠體稱為Ni-chelate, Ni-IDA 或 Ni-NTA 膠體。
由於組氨酸上的咪唑官能基帶有局部負電荷，故組氨酸標籤能與被膠體螯合住的金屬離子產生異性電荷相吸力，因此帶有組氨酸標籤的蛋白質即可被膠體吸附，其餘宿主的蛋白質因無法吸附所以被流洗掉，接著用含有150-300mM的咪唑(Imidazole)溶液將重組蛋白洗出，達到純化的效果。
偵測 编辑
組氨酸標籤可以作為抗原，故可利用抗體偵測帶有組氨酸標籤的重組蛋白。廣泛用於酵素結合免疫吸附分析法（ELISA）及西方墨點法（western blotting）等免疫分析方法。亦可利用含有金屬離子的螢光染劑，將聚丙烯醯胺凝膠膠體染色。
固著 编辑
帶有組氨酸標籤的蛋白質，可固著(immobilization)於有鎳離子或鈷離子塗層之微量滴定板(microtiter plate)或是蛋白質晶片上。
参考资料 编辑
- ^ Hochuli, E.; Bannwarth, W.; Döbeli, H.; Gentz, R.; Stüber, D. Genetic Approach to Facilitate Purification of Recombinant Proteins with a Novel Metal Chelate Adsorbent. Nature Biotechnology. 1988, 6 (11): 1321–1325. doi:10.1038/nbt1188-1321.
組氨酸標籤, 英語, polyhistidine, hexa, histidine, 6xhis, his6, 是由連續六個以上的組氨酸所組合而成的一段氨基酸序列, 最初為roche公司發明, 帶有的质粒則為qiagen所有, 由於原始的專利保護已經過期, 故不論學術或商業皆可免費使用, 一般而言, 科學家藉由基因工程將此標籤放置於重組蛋白質的n端, c端或兩端, 目录, 應用, 蛋白質純化, 偵測, 固著, 参考资料應用, 编辑蛋白質純化, 编辑, 以大腸桿菌或其他原核生物表現的重組蛋白會累積在細胞質中, 為了取. 組氨酸標籤 英語 Polyhistidine tag 或 hexa histidine tag 6xHis tag His6 tag 是由連續六個以上的組氨酸所組合而成的一段氨基酸序列 最初為Roche公司發明 1 帶有組氨酸標籤的质粒則為Qiagen所有 由於原始的專利保護已經過期 故不論學術或商業皆可免費使用 一般而言 科學家藉由基因工程將此標籤放置於重組蛋白質的N端 C端或兩端 目录 1 應用 1 1 蛋白質純化 2 偵測 3 固著 4 参考资料應用 编辑蛋白質純化 编辑 以大腸桿菌或其他原核生物表現的重組蛋白會累積在細胞質中 為了取得重組蛋白 以物理性的方式如高壓 或生物性的方式如溶菌酶 或兩種方式合併使用去破壞細胞膜 使得重組蛋白懸浮於緩衝溶液中 此時要將重組蛋白從許許多多細菌的蛋白質中分離出來並不容易 但若重組蛋白帶有組氨酸標籤 則利用親和性層析即可有效的進行純化 市面上常見的組氨酸標籤親和性層析法 是利用瓊脂糖 Agarose 為膠體的基底 resin beads 在瓊脂糖上修飾螯合劑亞氨基二乙酸 iminodiacetic acid IDA 或氨三乙酸 nitrilotriacetic acid NTA 此時膠體即可螯合二價或三價的金屬離子 例如鎳離子 鈷離子 銅離子及鐵離子 組氨酸標籤親和性層析膠體最常搭配的二價離子為鎳離子 螯合上鎳離子的膠體稱為Ni chelate Ni IDA 或 Ni NTA 膠體 由於組氨酸上的咪唑官能基帶有局部負電荷 故組氨酸標籤能與被膠體螯合住的金屬離子產生異性電荷相吸力 因此帶有組氨酸標籤的蛋白質即可被膠體吸附 其餘宿主的蛋白質因無法吸附所以被流洗掉 接著用含有150 300mM的咪唑 Imidazole 溶液將重組蛋白洗出 達到純化的效果 偵測 编辑組氨酸標籤可以作為抗原 故可利用抗體偵測帶有組氨酸標籤的重組蛋白 廣泛用於酵素結合免疫吸附分析法 ELISA 及西方墨點法 western blotting 等免疫分析方法 亦可利用含有金屬離子的螢光染劑 將聚丙烯醯胺凝膠膠體染色 固著 编辑帶有組氨酸標籤的蛋白質 可固著 immobilization 於有鎳離子或鈷離子塗層之微量滴定板 microtiter plate 或是蛋白質晶片上 参考资料 编辑 Hochuli E Bannwarth W Dobeli H Gentz R Stuber D Genetic Approach to Facilitate Purification of Recombinant Proteins with a Novel Metal Chelate Adsorbent Nature Biotechnology 1988 6 11 1321 1325 doi 10 1038 nbt1188 1321 取自 https zh wikipedia org w index php title 組氨酸標籤 amp oldid 78973123, 维基百科，wiki，书籍，书籍，图书馆，
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